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基因枪操作流程
点击次数:2778 更新时间:2011-08-23

基因枪微弹的制备:
1、EP管称取60 mg (或3mg)金粉;
2、加入1ml (或50ul)无水乙醇,振荡1min,10000rpm离心10S;
3、弃上清,加入1ml(或50ul) 无菌水洗,振荡1min,10000rpm离心10S;
4、弃上清,加入1ml(或50ul) 无菌水洗,振荡1min, -20℃;
DNA的包裹
1、50ul金粉悬液于EP管;
2、依次加入5ul/3ul质粒DNA(1ug/ul),50ul 2.5M CaCl2 和20ul 0.1M亚精胺(每加完一样可振荡3S),静置10min; 
3、振荡3S,冰上10min,10000rpm离心10S,弃上清;
4、80ul无水乙醇,震荡重悬,10000rpm离心10S,弃上清;
5、10ul无水乙醇定容(重悬);
6、每次用10ul点于微粒载膜中央,使其平铺,晾至*干燥,待用;
基因枪的操作
1、打开真空泵和基因枪的电源开关;
2、打开氦气瓶阀门,旋转氦气调节杆,使气压高于所选可裂膜压力200psi左右;
3、旋下可裂膜挡盖,将可裂膜放在挡盖中央,将挡盖旋上,用板水平加固;
4、把微粒发射装置移出轰击室,旋下盖子,放入阻挡网,把微粒载片安装在固定槽中(有微粒的一面朝下),旋上盖子,将发射装置放回轰击室;
5、将样品盘放置在轰击室的适当位置,关上轰击室门;
6、按VAC开关(上档)抽真空,当表上读数为所需值时,开关打到HOLD(下档),然后按住FIER开关,当达到适当压力可裂膜自动破裂,松开FIER开关;
7、开关打到VENT(中间档),以释放轰击室内的真空;
8、打开轰击室门,取出样品盘;
9、取出微粒发射装置,卸下微粒载膜和阻挡网(阻挡网和微粒载膜放入70%的酒精浸泡);
10、旋下可裂膜挡盖,清除可裂膜碎片;
11、若PDS—1000\He 型基因枪不再使用,关掉氦气瓶的主阀,按住FIER开关,按住FIE开关,放掉气体加速管内的氦气压力,zui后关掉一切电源;
文章关键词:基因枪

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